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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法三羧酸循環(huán)系列BC5950-50T/48S異檸檬酸含量檢測(cè)試劑盒 三羧酸
產(chǎn)品型號(hào)：BC5950-50T/48S
更新時(shí)間：2024-07-09
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：2207
010-50973130
產(chǎn)品分類
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異檸檬酸含量檢測(cè)試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號(hào)：BC5950
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體750 μL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 2-8℃保存 | |
粉劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二工作液：臨用前先離心，根據(jù)樣本量按試劑二：蒸餾水=10μL：90μL（共100μL，約1T）的比例配制后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、 試劑三：臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解，未用完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL異檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品。
4、 工作液：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一：試劑二工作液：試劑三=750μL：100μL：50μL（共900μL，約1T）配成工作液后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明：
異檸檬酸（Isocitric Acid）是檸檬酸的異構(gòu)體，在許多水果和蔬菜以及由這些原料制成的食品中發(fā)現(xiàn)了大量的異檸檬酸鹽。生物能夠利用的是D型異檸檬酸，是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)成分。異檸檬酸在異檸檬酸脫氫酶（ICDH，EC1.1.1.41）的作用下變成a-酮戊二酸，同時(shí)NAD（P）還原為NAD（P）H，據(jù)此可以計(jì)算異檸檬酸含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體的操作步驟請(qǐng)見“產(chǎn)品資料"文件
注意事項(xiàng)：
1.最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2.若樣本ΔA<0.005，可適當(dāng)增大樣本量后測(cè)定；若樣本ΔA>1.2或A測(cè)定>1.5，可用蒸餾水稀釋上清液后測(cè)定，
注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
3.提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定，如需測(cè)定蛋白濃度，需另取組織。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取0.1139g蘋果加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，取上清后按照測(cè)定步驟操作，用1mL石英比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.241-0.125）-（0.066-0.059）=0.109，帶入標(biāo)曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計(jì)算x=1.100，按樣本質(zhì)量計(jì)算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W×F=11.468 μmol/g 質(zhì)量。
2、 取0.1033g橙子葉加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用1mL石英比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（1.001-0.923）-（0.066-0.059）=0.071，帶入標(biāo)曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計(jì)算x=0.832，按樣本質(zhì)量計(jì)算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W×F=19.129 μmol/g 質(zhì)量。
3、 取500μL橙汁飲料取上清后按照測(cè)定步驟操作，用1mL石英比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.856-0.840）-（0.066-0.059）=0.009，帶入標(biāo)曲y==0.1414x-0.0466，R2=0.9991，計(jì)算x=0.393，按液體體積量計(jì)算異檸檬酸含量得：
異檸檬酸含量（μmol/mL）=x×F=0.393 μmol/mL。
參考文獻(xiàn)：
[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.
[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.
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