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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產品型號：BC5050-50T/24S
更新時間：2024-07-07
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：930
010-50973130
產品分類
血清淀*酶（AMY）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書
可見分光光度法
貨號：BC5050
規(guī)格：50T/24S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入25mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解；用不完的試劑2-8℃保存1個月。
2、 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中，用蒸餾水定容至20mL，2-8℃避光保存一個月。
3、 標準品：10mg淀粉標準品。臨用前加10mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，配成1mg/mL淀粉標準液。用不完的試劑2-8℃保存1個月。
產品說明：
血清淀*酶( Serum amylase， AMY) 屬于α-淀*酶，以無規(guī)則方式水解多糖分子內部的α-1,4糖苷鍵，生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指腸、肺、子宮、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結合，生成在570nm下有特征吸收峰的復合物，其深淺可計算出淀*酶的活力單位。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：
一、 粗酶液提取
取100μL血清和400μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍），分為2管250μL分別作為測定管和對照管。若實驗后所測數(shù)值偏大或者偏小，可以調整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將200μL血清和300μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）
二、 測定步驟和加樣表
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至570nm，蒸餾水調零。
2、 將淀粉標準液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標準溶液。
3、 按操作表依次加入各試劑：
測定管 | 對照管 | 空白管1 | 標準管 | 空白管2 | |
血清稀釋液 | 250 | 250 | - | - | - |
蒸餾水 | - | - | 250 | - | 250 |
標準溶液 | - | - | - | 250 | - |
試劑一 | 500 | - | 500 | - | - |
試劑二 | - | 500 | - | 500 | 500 |
在37℃恒溫水浴中準確保溫10min | |||||
試劑三 | 250 | 250 | 250 | 250 | 250 |
混勻后于15min內測定570nm處測定管、對照管、空白管1、標準管、空白管2的吸光度，分別記為A測定、A對照、A空白1、A標準和A空白2，計算ΔA測定=（A空白1-A空白2）-（A測定-A對照），ΔA標準=A標準-A空白2。標準曲線、空白管1、空白管2做1-2次即可。
三、AMY活性計算
1、 標準曲線的繪制
以ΔA標準為y軸，以標準溶液濃度為x軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b。將ΔA測定帶入方程得到x（mg/mL）。
2、按照血清體積計算：
單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。
AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F
V樣：加入反應體系中樣本體積，0.25 mL；T：反應時間，10min；F：稀釋倍數(shù)。
注意事項：
1. ΔA測定大于1.5時，可以對樣本進行適當稀釋后測定。
2. 反應完成后需在15min內測定吸光度。
實驗實例：
1、 取100μL牛血清和400μL蒸餾水混合（即血清稀釋5倍）后，按照測定步驟操作，計算ΔA測定= （A空白1-A空白2）-（A測定-A對照）=（1.137-0.029）-（0.986-0.012）=0.134，帶入標準曲線y=1.9683x+0.0082，計算x=0.0639，按公式計算活性：
AMY（U/mL）=0.1×x×F =0.1×0.0639×5=0.0320 U/mL。
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