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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產(chǎn)品型號：BC5310-50T/48S
更新時間：2024-04-19
廠商性質：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1890
010-50973130
產(chǎn)品分類
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細胞鐵含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5310
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準液 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 標準液：1 μmol/mL Fe3+標準液，臨用前取200μL 1 μmol/mL Fe3+標準液，加入200μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.5μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
產(chǎn)品說明：
鐵元素是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機體的免疫功能。
鹽酸羥胺將細胞中的Fe3+還原成Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計算鐵含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為1000~2000︰1的比例（建議500萬細胞加入0.5mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3秒，間隔7秒，重復30次），于4℃，8000g離心10min，取上清待測。
若樣本為真菌、細菌等有細胞壁的微生物可以適當延長超聲時間。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計預熱30min，波長調(diào)至510nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 在1.5mL EP管按下表步驟加樣：
測定管 | 空白管 | 標準管 | |
樣本 | 100 | - | - |
蒸餾水 | - | 100 | - |
標準溶液 | - | - | 100 |
試劑一 | 200 | 200 | 200 |
試劑二 | 600 | 600 | 600 |
試劑三 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，25℃靜置顯色10min，于1mL玻璃比色皿中測定510nm處吸光值，分別記為A測定、A空白和A標準，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白?？瞻坠芎蜆藴?/span>管只需做1-2次。 | |||
三、細胞鐵含量計算
1. 按細胞數(shù)目計算：
細胞鐵含量（ng/104 cell）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×103×55.845÷500
=27.922×ΔA測定÷ΔA標準
2. 按蛋白濃度計算：
細胞鐵含量（ng/mg prot） =（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×103×55.845÷（Cpr×V提?。?/span>
= 27922.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
C標準液：0.5μmol/mL Fe3+標準液；V提?。杭尤胩崛∫后w積，0.5mL；103：單位換算系數(shù)，1μmol=103nmol；55.845：Fe的相對原子質量，55.845ng/nmol；500：細胞數(shù)目，500萬；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL。
注意事項：
1、 如果ΔA測定＜0.01，可適當加大樣本量后重新測定；如果測定管吸光值大于1，建議將樣本用蒸餾水適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。
2、 如果按蛋白濃度計算細胞鐵含量，需自行測定樣本上清蛋白濃度。
實驗實例：
1、 取500萬HePG2細胞加入0.5mL提取液進行超聲破碎提取，離心取上清后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.171-0.000=0.171，ΔA標準=A標準-A空白=0.573-0.000=0.573，按細胞數(shù)目計算含量得：
細胞鐵含量（ng/104 cell）=27.922×ΔA測定÷ΔA標準=8.333 ng/104 cell
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