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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC1955-100T/48S
更新時間：2024-04-19
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：998
010-50973130
產(chǎn)品分類
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土壤錳過氧化物酶（S-Mnp)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1955
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體5mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑一：甲苯，需自備。
2. 試劑三：臨用前加入3.5mL蒸餾水，用不完的試劑可在2-8℃保存3個月，禁止放置于-20℃。
產(chǎn)品說明：
錳過氧化物酶 (EC1.11.1.13) 是一種含鐵血紅素的過氧化物酶，其廣泛存在于白腐擔(dān)子真菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，是木質(zhì)素起始降解的關(guān)鍵酶，能有效地降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物、疊氮化合物、DTT、多環(huán)方烴等，在農(nóng)業(yè)廢棄物處理、生物降解、生物漂白、染料脫色等領(lǐng)域有較多的研究和應(yīng)用。
錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯、30-50目篩和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃風(fēng)干，過30-50目篩。
二、測定步驟
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至465nm，分光光度計需用蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑)：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
土樣（g） | 0.08 | 0.08 |
試劑一（μL） | 40 | 40 |
充分震蕩混勻，25℃準(zhǔn)確水浴15min | ||
試劑二（μL） | 240 | 280 |
試劑三（μL） | 40 | - |
試劑四（μL） | 80 | 80 |
試劑五（μL） | 40 | 40 |
充分混勻，于30℃振蕩反應(yīng)3h，于11000g，4℃離心10min (如果尚未澄清，可取出上清后再次離心)，取200μL于微量比色皿/96孔板，測定465nm處吸光值，記為A測定管和A對照管，ΔA=A測定管-A對照管。注意：每個測定管均需設(shè)一個對照管。 | ||
三、S-Mnp活力的計算
a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下：
酶活性定義：每克土壤每小時氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
S-Mnp活性（U/g 土樣）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷W÷T=12.121×ΔA÷W
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.44×10-3L；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h；109：換算系數(shù)，1mol=109 nmol。
b.用96孔板測定的計算公式如下：
酶活性定義：每克土壤每小時氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
S-Mnp活性（U/g）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷W÷T=20.202×ΔA÷W
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.6cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.44×10-3L；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h。
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