土壤丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

單位
盒
中文名稱
土壤丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒
有效期
6個(gè)月
儲(chǔ)存條件
-20℃
英文名稱
Soil Pyruvate ( S-PA ) Content Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

產(chǎn)品型號(hào)：BC5530-50T/24S

更新時(shí)間：2024-04-19

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn) 量：1012

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性檢測(cè) 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè) α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測(cè) 硫代葡萄糖苷含量檢測(cè) 生物堿含量檢測(cè) 總氧化狀態(tài)（TOS）檢測(cè) α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測(cè) 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測(cè) 水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測(cè) 植物銨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列信號(hào)系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

土壤丙酮酸（S-PA）含量檢測(cè)試劑盒（酶法）說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC5530

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體60mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑三	液體40μL×1支	2-8℃保存
試劑四	液體8 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前加入3.6mL蒸餾水充分溶解，分裝保存，-20℃可以保存4周，避免反復(fù)凍融。

2、試劑三：臨用前按試劑三：蒸餾水=10μL：1mL（共1.01mL，約13T）的比例進(jìn)行稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3、標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

丙酮酸通過(guò)乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。

在pH=7.5時(shí)，丙酮酸在LDH的催化作用下與NADH反應(yīng)，生成NAD⁺和乳酸。在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性Formazan。通過(guò)檢測(cè)450nm條件下吸光值，可以計(jì)算出丙酮酸含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽、超聲清洗儀、30-50目篩和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

稱取風(fēng)干混勻土樣約0.1g，加入1mL蒸餾水混勻；然后置于超聲清洗儀常溫超聲30min。然后12000g，常溫離心10min，取上清液待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一37℃預(yù)熱20min以上。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將20μmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋得到0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

4、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

序號(hào)	稀釋前濃度（μmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（μmol/mL）
1	20	50	950	1
2	1	500	500	0.5
3	0.5	500	500	0.25
4	0.25	500	500	0.125
5	0.125	500	500	0.0625
6	0.0625	500	500	0.03125

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5、操作表：(在1.5mLEP管中加入下列試劑)

試劑名稱（µL）	測(cè)定管	對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
上清液	100	100	-	-
標(biāo)準(zhǔn)品	-	-	100	-
蒸餾水	-	-	-	100
試劑一	775	900	775	775
試劑二	50	-	50	50
試劑三	75	-	75	75
混勻后37℃反應(yīng)30min
試劑四	100	100	100	100
混勻后37℃避光反應(yīng)30min。于1mL玻璃比色皿，測(cè)定450nm下的吸光度，計(jì)算ΔA_測(cè)定= A_空白-(A_測(cè)定-A_對(duì)照)， ΔA_{標(biāo)準(zhǔn)}=A_空白-A_{標(biāo)準(zhǔn)}。（標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測(cè)1-2次即可）

三、土壤丙酮酸含量計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA_{標(biāo)準(zhǔn)}（y，ΔA_{標(biāo)準(zhǔn)}），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA_測(cè)定代入方程得到x（μmol/mL）。

2、土壤丙酮酸含量計(jì)算：

土壤丙酮酸含量（μmol/g 質(zhì)量）= x×V樣÷(V樣÷V提×W) = x÷W

V樣：加入的樣本體積，0.1mL；V提：前處理中加入蒸餾水的體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、稱取約0.103g花盆土，加入1mL蒸餾水，超聲破碎30min，10000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。之后按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA_測(cè)定= A_空白-（A_測(cè)定-A_對(duì)照）=0.843-（0.493-0.028）=0.378，標(biāo)曲y=1.4576x-0.0002，R²=0.9924，x=0.2595µmol/mL, 計(jì)算丙酮酸含量得：

丙酮酸含量（µmol/g 質(zhì)量）= x×V樣 ÷(V樣÷V提×W) = x÷W =2.5191µmol/g 質(zhì)量。

2、稱取約0.101g污泥，加入1mL蒸餾水，超聲破碎30min，10000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。之后按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA_測(cè)定= A_空白-（A_測(cè)定-A_對(duì)照）=0.843-（0.528-0.135）=0.450，標(biāo)曲y=1.4576x-0.0002，R²=0.9924，x=0.3089µmol/mL, 計(jì)算丙酮酸含量得：