ATP含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0300
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液低溫條件下，可能有結(jié)晶析出，放于60℃水浴加熱溶解即可，不影響使用。

2. 試劑二：臨用前加入7 mL蒸餾水充分溶解，可加熱促進(jìn)溶解，2-8℃可保存4周；

3. 試劑四：臨用前取1支加入0.2mL蒸餾水溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；

4. 試劑五：臨用前加入3.2 mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

5. 試劑六：臨用前取1支加入0.25 mL蒸餾水備用，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；

6. 標(biāo)準(zhǔn)品：5 mg ATP。臨用前加入0.826 mL蒸餾水配成10 μmol/mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

7. 工作液的配制：臨用前請(qǐng)按試劑二(mL)：試劑三(mL)：試劑四(mL)：試劑五(mL)：試劑六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1的比例配制（2.6mL，約10T的量），現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說(shuō)明：
ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP 含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反應(yīng)ATP含量。

技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.0023 μmol/mL
線性范圍：0.0390625-2.5 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水、冰和氯仿。
“具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項(xiàng)：

1. 加入提取液離心后的上清若為渾濁為正?，F(xiàn)象。

2. 如果吸光值大于1.1，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果吸光值過(guò)低或接近空白，建議加大樣本量后進(jìn)行測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g兔肺臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心10min，取上清至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清，置冰上按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.083-0.066=0.017，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)=0.430-0.191=0.239，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

ATP含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.625×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.625×0.017÷0.239÷0.1=0.445 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心10min，取上清至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清，置冰上按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.511-0.479=0.032，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)==0.430-0.191=0.239，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

ATP含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.625×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.625×0.032÷0.239÷0.1=0.837 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取兔血清0.1mL 加入1mL 提取液，充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取上清液至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清置冰上檢測(cè)，ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.051-0.038=0.013，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)=0.430-0.191=0.239，按液體體積計(jì)算含量得：

ATP含量(μmol/mL) =6.875×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=6.875×0.013÷0.239=0.374 μmol/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Meixi Peng, Dan Yang,Yixuan Hou, et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

2. Yang Wang, Jianhang Jiao, Shanyong Zhang, et al. RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury. Biomedicine & Pharmacotherapy. August 2019;116.(IF3.743)

3. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018.

參考文獻(xiàn)：

1. Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

2. Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0060/BC0065   Na⁺k⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒
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