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干貨分享—常用的細胞凋亡檢測方法匯總(一)

更新時間:2025-04-17點擊次數(shù):789

常用的細胞凋亡

檢測方法匯總(二)

細胞凋亡檢測對探究相關機制意義重大,本文主要介紹DNA片段化、線粒體及溶酶體檢測三個方面。細胞凋亡時,染色質DNA會規(guī)律性斷裂,形成180-200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段。通過瓊脂糖凝膠電泳能觀察到 “梯狀" 條帶,TUNEL法可標記斷裂DNA末端,實現(xiàn)高靈敏度檢測及細胞定位。線粒體在凋亡調(diào)控中作用關鍵,凋亡時膜電位改變,使用JC-1等熒光探針,依據(jù)熒光強度變化可知線粒體功能狀態(tài)。溶酶體檢測可利用溶酶體熒光探針,其熒光特性會隨溶酶體膜通透性改變而變化;檢測溶酶體相關酶如組織蛋白酶的活性,同樣能反映細胞凋亡情況。這些方法從不同層面助力細胞凋亡研究。

本文分享了常見的幾種細胞凋亡檢測方法,讓我們一起學習一下吧~


 

01

DNA片段化

細胞凋亡晚期,細胞核碎裂呈現(xiàn)片段化的DNA。熒光/生物素標記的dUTP在TdT酶的介導下與碎片化DNA暴露的-3'OH末端結合,原位檢測晚期凋亡特征。

 

02

線粒體檢測

在細胞凋亡過程中,線粒體膜通透性轉換孔MPTP過度開放,線粒體跨膜電位降低,還會導致一些相關的促凋亡因子,如cytochrome c、AIF、Bcl-2家族以及pro-caspase等從線粒體釋放到胞質中;同時線粒體內(nèi)的Bcl-2家族對細胞凋亡具有雙向調(diào)節(jié)作用。線粒體膜通透性發(fā)生改變時,其跨膜電位降低,細胞進入不可逆的凋亡過程。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。

 

03

溶酶體檢測

在特定條件下,包括活性氧、鞘氨醇、細胞凋亡效應因子Bax等在內(nèi)的多種刺激因子均可誘發(fā)溶酶體膜通透性的改變,之后溶酶體內(nèi)含的蛋白酶(如組織蛋白酶等)及其他水解酶從溶酶體釋放至胞漿中,通過剪切效應分子,激活包括凋亡酶在內(nèi)的其他水解酶而啟動細胞凋亡程序的執(zhí)行。
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