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免疫細(xì)胞的分離技術(shù) 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

免疫細(xì)胞的分離技術(shù)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離用體外方法對(duì)機(jī)體各種具有免疫反應(yīng)的細(xì)胞分別作鑒定、計(jì)數(shù)和功能測(cè)定，是觀察機(jī)體免疫狀態(tài)的一種重要手段。為此，須將各種參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞從血液或臟器中分離出來(lái)。參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞主要包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。實(shí)驗(yàn)根據(jù)不同需求有的僅需分離白細(xì)胞，有的則需分離單個(gè)核細(xì)胞（mononuclearcell），其中含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte），有的則需分離T細(xì)胞和B細(xì)胞以及其亞群。白細(xì)胞包括以下細(xì)胞外周血中單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)...

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DNA Loading Buffer使用說(shuō)明書

DNALoadingBuffer貨號(hào)：D1010規(guī)格：5ml/100ml保存：室溫保存，有效期少12個(gè)月。產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本產(chǎn)品是6倍濃縮的DNA上樣緩沖液，用于DNA凝膠電泳，能促使DNA樣品沉入凝膠加樣孔中。其主要成份為甘油，EDTA，溴酚藍(lán)和二甲苯青等。溴酚藍(lán)和二甲苯青用作電泳時(shí)的指示劑，可指示電泳進(jìn)程。使用說(shuō)明：1、請(qǐng)按每5微升DNA樣品加入1微升6×DNALoadingBuffer上的比例(6倍稀釋)來(lái)使用。2、混勻后，直接加到DNA凝膠加樣孔中，電泳。注意事項(xiàng)：1、如果...

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熒光抗體稀釋液使用說(shuō)明

一抗體稀釋，主要用來(lái)稀釋*抗體，稀釋過(guò)的一抗可4度保存3-6個(gè)月。主要含有蛋白穩(wěn)定劑，PBS，疊氮鈉等，不適合于稀釋酶標(biāo)記抗體及待標(biāo)記抗體。酶標(biāo)抗體稀釋液只適合于稀釋對(duì)應(yīng)的抗體，稀釋過(guò)的抗體可4度保存3-6個(gè)月。熒光抗體稀釋液稀釋過(guò)的熒光抗體可4度避光保存一周。免疫熒光抗體稀釋液(ImmunofluorescenceStainingAntibodyDilutionBuffer)可以用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)時(shí)熒光標(biāo)記抗體的稀釋和配制。產(chǎn)品添加了抗體保護(hù)劑、穩(wěn)定劑等成分，有效增加了稀釋后...

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Western Blot常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)

WB常見(jiàn)問(wèn)題常見(jiàn)問(wèn)題解決對(duì)策及注意事項(xiàng)兩快玻璃板之間灌膠,膠總是不平玻璃沒(méi)有洗干凈，應(yīng)該要洗得非常干凈過(guò)硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對(duì)較多，凝膠凝固過(guò)快，也會(huì)造成膠不平現(xiàn)象加完試劑以后沒(méi)有很好的搖勻，導(dǎo)致有些部位的聚合劑濃度過(guò)高，聚合相對(duì)較快造成膠不平膠總是漏避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損膠條一定要干，跑完電泳后，膠條就放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾著。下面的膠條注意不要老化，如果有裂紋的話用保鮮膜墊在上面，也可以有效防止漏膠將兩塊玻板擺放*對(duì)齊，底部處于同一個(gè)平面膜上有明顯氣泡...

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蛋白印跡用緩沖液及洗滌液

轉(zhuǎn)印緩沖液提供了電極之間的電連續(xù)性，其必須是導(dǎo)電的。它還提供了一個(gè)化學(xué)環(huán)境，能維持蛋白質(zhì)的溶解度，又不妨礙轉(zhuǎn)移過(guò)程中蛋白質(zhì)吸附到膜上。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)印緩沖液包含緩沖系統(tǒng)和甲醇。Tris甘氨酸緩沖液，常用于槽轉(zhuǎn)印系統(tǒng)中。這種緩沖液的pH值為8.3，比大多數(shù)蛋白的等電點(diǎn)（pI）要高。在凝膠上分離的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，向陽(yáng)極遷移。由于槽內(nèi)的緩沖液是混合的，故轉(zhuǎn)移過(guò)程中的離子分布保持相對(duì)恒定。在蛋白測(cè)序應(yīng)用中，建議使用10mMCAPS緩沖液（pH=11）。凝膠電泳緩沖液中殘留的甘氨酸導(dǎo)致蛋白測(cè)...

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尼龍膜、PVDF膜、NC膜區(qū)別

轉(zhuǎn)印膜：用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗(yàn)過(guò)程的微孔膜。Southernblot：又稱Southern印跡雜交，是研究DNA圖譜的基本技術(shù)。Northernblot：又稱Northern印跡雜交，是檢測(cè)RNA的基本技術(shù)。Westernblot：又稱Western印跡雜交，是蛋白質(zhì)檢測(cè)分析的基本技術(shù)。轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)用廣泛，不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同，選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用。常用的三種轉(zhuǎn)印膜：硝酸纖維素膜（NC膜）、帶正電的...

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實(shí)驗(yàn)室詳解單克隆抗體的制備過(guò)程

單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)。由G.K?hler和Milstein1975年創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)抗體。單克隆抗體的制備過(guò)程主要有以下六個(gè)環(huán)節(jié)，具體為抗原指標(biāo)、免疫動(dòng)物選擇、免疫程序的確定、免疫、細(xì)胞雜交與選擇培養(yǎng)。單抗制備步驟1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說(shuō)雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機(jī)會(huì)增加，同時(shí)可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純?cè)胶?，?yīng)根據(jù)所研究的抗原和實(shí)驗(yàn)室的條件來(lái)決定。2、免疫動(dòng)物...

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Western/ELISA顯色底物大盤點(diǎn)

一、HRP辣根過(guò)氧化酶是常見(jiàn)的酶促發(fā)光或顯色的交聯(lián)酶，由于HRP比活高、特異性更強(qiáng)、分子量小（40kD）、穩(wěn)定性好和作用底物范圍廣的優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛使用。HRP的底物種類有不少，主要可以分為化學(xué)發(fā)光底物和生色底物2大類:1.化學(xué)發(fā)光底物：化學(xué)發(fā)光底物主要考慮的是：發(fā)光信號(hào)強(qiáng)弱——發(fā)光信號(hào)當(dāng)然越強(qiáng)越好，強(qiáng)發(fā)光信號(hào)持續(xù)的時(shí)間也是越長(zhǎng)越好，還有就是背景低靈敏度高。原理：試劑中的發(fā)光物在辣根過(guò)氧化物酶的作用下發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長(zhǎng)為428nm的光，此光可經(jīng)x光膠片(放射自顯影片)感光...

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