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關(guān)于WB實(shí)驗(yàn)中蛋白樣品制備的常見問題分析

WB實(shí)驗(yàn)又稱免疫印跡實(shí)驗(yàn)，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。對(duì)于一直都在做蛋白研究的你，在樣品制備中的小細(xì)節(jié)你都了解嗎？這里為大家整理了蛋白樣品制備中大大小小的常見問題，一起來學(xué)習(xí)吧！1、所有WB實(shí)驗(yàn)都用總蛋白就可以完成嗎？當(dāng)然不是，要根據(jù)WB的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩泶_定提取哪類蛋白，如需驗(yàn)證某些低...

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PCR定量試劑盒為什么會(huì)檢測(cè)出現(xiàn)假陽性，哪些原因造成的？

PCR定量試劑盒的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。PCR熒光定量是一種非常敏感的檢測(cè)方法，但是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常開展檢測(cè)工作，一旦實(shí)驗(yàn)室管理和環(huán)境控制沒有執(zhí)行到位，就存在由于交叉污染出導(dǎo)致假陽性的風(fēng)險(xiǎn)。PCR定量試劑盒檢測(cè)出現(xiàn)假陽性的常見原因：1、實(shí)驗(yàn)室污染是導(dǎo)致假陽性結(jié)果實(shí)驗(yàn)室如果長(zhǎng)期檢測(cè)陽性樣本，擴(kuò)增產(chǎn)物中高濃度的目的片段很容易擴(kuò)散到空氣中并不斷累積導(dǎo)致氣...

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要想很好的應(yīng)用SOC液體培養(yǎng)基，就必須了解它

SOC液體培養(yǎng)基是分子生物學(xué)中常用的培養(yǎng)基，用于制備高效率的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，也用于熱激后感受態(tài)細(xì)胞的復(fù)蘇。本產(chǎn)品為即用型液體培養(yǎng)基，免去了客戶稱量、配制、滅菌、清洗等重復(fù)勞動(dòng)，減少了用戶儲(chǔ)存、保管和購(gòu)買試劑需要花費(fèi)的時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率。SOC培養(yǎng)基用各種營(yíng)養(yǎng)成分加水配成，或用天然物質(zhì)的浸汁[麥芽汁，豆芽汁等]制成。組分均一，適宜各類微生物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究及大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中，有利于廣泛獲得大量菌體或代謝產(chǎn)物。SOC液體培養(yǎng)基在靜止的條件下，在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周...

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關(guān)于核酸變性預(yù)制膠的操作步驟，你了解多少？

核酸變性預(yù)制膠在分離片段DNA分子時(shí)效果很好，分辨率很高，甚至相差1bp的DNA的片段都能分開，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣孔中可以容納相對(duì)大量的DNA。所以常被用于蛋白印跡實(shí)驗(yàn)、遺傳圖譜構(gòu)建、數(shù)量形狀基因定位、標(biāo)記輔助選擇等生物多樣性研究等。核酸變性預(yù)制膠的操作步驟：一、非變性預(yù)制膠：1、準(zhǔn)備樣品：將樣品和loadingbuffer（5×）按照4：1混合均勻。2、準(zhǔn)備1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去離子水至1L，制備成1×TBEbuffer。3、...

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教你成為平淡無奇的WB小能手-結(jié)尾篇

大家好，小編又又又來了。今天是WB最后一步了，抗體孵育到顯影過程。01一抗孵育◆封閉結(jié)束前20min準(zhǔn)備和所需一抗數(shù)量相等的孵育盒，在孵育盒上用記號(hào)筆標(biāo)注出抗體編號(hào)及所需稀釋比。按照規(guī)定的稀釋比例進(jìn)行抗體稀釋。稀釋比例建議預(yù)實(shí)驗(yàn)提前摸索或者根據(jù)抗體說明書上建議?！舴忾]時(shí)間結(jié)束之后，倒掉封閉液，將稀釋好的抗體加入到槽內(nèi)，將搖床放入4℃展示柜孵育過夜?！舻诙鞂u床搬出，平衡室溫?fù)u15min，倒掉一抗工作液，加入5mLTBST潤(rùn)洗膜一次，倒掉，加新的TBST洗膜5min，倒掉TB...

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Elisa檢測(cè)試劑盒的顯色液A和B有什么作用？

Elisa檢測(cè)試劑盒具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的測(cè)定,為輔助臨床診斷與生物科研起到了積的作用。Elisa檢測(cè)試劑盒檢測(cè)中顯色液A和B有什么作用？酶聯(lián)免疫診斷試劑盒的底物A就是顯色劑A（含過氧化氫）為供氫體（DH2）,底物B就是顯色劑B（含TMB）,用于顯色。另外，常用的底物還有：AP的底物，常用的為對(duì)-硝基苯磷酸脂（PNP），其反應(yīng)物為黃色的對(duì)硝基酚，測(cè)讀波長(zhǎng)為405nm2）GOD的底物，為葡萄糖，供氫體為對(duì)硝基藍(lán)四氮唑，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶...

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蛋白Marker試劑的使用特點(diǎn)，您了解多少？

蛋白Marker試劑是生物學(xué)常用的試劑之一，不僅可以用于直觀地監(jiān)測(cè)電泳的進(jìn)程，評(píng)估PVDF、尼龍和纖維素膜的轉(zhuǎn)移效率、還可以用于計(jì)量蛋白質(zhì)的大致分子量。Marker是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了實(shí)驗(yàn)，可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率。由于預(yù)染蛋白Marker是與染料共價(jià)耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化，可能導(dǎo)致一些偏差，所以不太適合定位蛋白...

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使用草酸銨結(jié)晶紫染色液前，這些知識(shí)先了解一下！

草酸銨結(jié)晶紫染色液是革蘭氏染色法中的一種成分，主要由草酸銨、結(jié)晶紫、乙醇等組成。細(xì)胞經(jīng)草酸銨結(jié)晶紫染色后再經(jīng)Gram碘液處理，形成不溶性復(fù)合物，該復(fù)合物不能通過細(xì)胞壁，不易被脫色，所以保持紫色。草酸銨結(jié)晶紫染色液使用說明：1、樣品處理：①對(duì)于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。70%乙醇2分鐘。蒸餾水2分鐘。②對(duì)于冰凍切片：蒸餾水2分鐘。③對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞：用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘。換...

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