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PCR定量試劑盒進(jìn)行引物探針確定的指標(biāo)分析

PCR定量試劑盒前期的驗(yàn)證引物探針性能和確定適反應(yīng)條件是確保正式實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的前提。那么前期驗(yàn)證引物探針我們需要怎么確定呢？主要指標(biāo)是基線、擴(kuò)增曲線、Ct值、擴(kuò)增效率、低濃度樣本檢出、CV等。一、基線基線是PCR擴(kuò)增曲線中水平的線，在PCR擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)中，熒光信號變化不大，成一條直線，這條直線即基線。在PCR定量試劑盒引物探針篩選時，要注意基線是否水平。引物探針濃度純度都會影響基線，如導(dǎo)致基線上抬，下降等。而基線也是一個很直觀的指標(biāo)。二、擴(kuò)增曲線另一個直觀地指標(biāo)是擴(kuò)增曲線形...

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記住這些知識點(diǎn)，你能也操作FITC熒光標(biāo)記抗體

FITC熒光標(biāo)記抗體是目前較為常用的標(biāo)記抗體的方法，F(xiàn)ITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶，性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下，F(xiàn)ITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價結(jié)合，形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物，即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個抗體分子上能標(biāo)記15~20個FITC分子，被標(biāo)記的抗體仍能保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力，在熒光燈源紫外線或藍(lán)紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光，通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察或利用流式細(xì)胞儀分析，從而對抗原進(jìn)行定性、定位或定量。下面就跟隨小編一起來了解其...

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操作需謹(jǐn)慎，WB實(shí)驗(yàn)時需要注意這些！

WB實(shí)驗(yàn)，蛋白質(zhì)印跡又稱免疫印跡，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。實(shí)驗(yàn)原理：一個基因表達(dá)結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或酶)。因此，檢測蛋白質(zhì)是測定基因表達(dá)的主要標(biāo)志，檢測蛋白質(zhì)的方法很多，除ELISA法外，也可用與檢測DNA和RNA相類似的吸印方法。而樣本制備是WB實(shí)驗(yàn)的開始也是重要的一步，它的操作雖然并不復(fù)雜，卻有很多需要注意的細(xì)節(jié)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要的目標(biāo)蛋白的不同，大致可以分為三種：總蛋白、膜蛋白和核蛋...

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白細(xì)胞稀釋液的操作過程

白細(xì)胞稀釋液是一種應(yīng)用在血液檢測過程中的試劑，白細(xì)胞稀釋液是一種具有酸堿緩沖作用、恰當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和電導(dǎo)率的電解質(zhì)平衡液。當(dāng)用于稀釋待測血樣時，其適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度能再一定時間內(nèi)完整地保持血細(xì)胞原來的體積，而其合適的電導(dǎo)率能保證獲得與細(xì)胞體積相應(yīng)的脈沖大小，保證測量結(jié)果準(zhǔn)確。采用的原理是將血液用稀釋液作定量稀釋后，紅細(xì)胞*溶解，注入計(jì)數(shù)池在顯微鏡下計(jì)數(shù)，然后計(jì)算出血液中白細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞稀釋液的操作過程：1、小試管1支，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。2、用微量吸管準(zhǔn)確吸取末稍血20μl...

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堿性固綠染色液的使用步驟

不同的氨基酸帶有不同化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈基團(tuán)，有的帶有堿性側(cè)鏈，有的帶有酸性側(cè)鏈，由此組成的蛋白質(zhì)具有不同數(shù)目的堿性基團(tuán)和酸性基團(tuán)，這些基團(tuán)會使蛋白質(zhì)在不同的pH溶液中帶有不同的凈電荷，整個蛋白質(zhì)分子帶正電荷多，即為堿性蛋白。堿性固綠染色液是利用堿性蛋白質(zhì)與帶有負(fù)電荷的堿性染料固綠結(jié)合進(jìn)行染色，細(xì)胞中含量最為豐富的堿性蛋白為組蛋白，主要存在于細(xì)胞核中，因此染色后細(xì)胞核大部分被染成綠色。使用步驟：1.取新鮮血液1滴滴于載玻片一端，推片，室溫晾干。2.涂片浸入70%乙醇中固定5min，...

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草酸銨結(jié)晶紫染色液的介紹

草酸銨結(jié)晶紫染色液是革蘭氏染色法中的一種成分,主要由草酸銨、結(jié)晶紫、乙醇等組成。革蘭陽性菌染色中,細(xì)胞經(jīng)草酸銨結(jié)晶紫染色后再經(jīng)Gram碘液處理，形成不溶性復(fù)合物，該復(fù)合物不能通過細(xì)胞壁,不易被脫色,所以保持紫色。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類鑒定。草酸銨結(jié)晶紫染色液是一種組織或細(xì)胞染色時常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。用于革蘭氏染色。結(jié)晶紫是一種堿性染料，可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合，可以與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合把核染...

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那些年對于ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的疑惑

“隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)了3篇SCI文章，我們還在處理數(shù)據(jù)，這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣？”小編每當(dāng)聽到這句話，每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者、那些把青春獻(xiàn)給實(shí)驗(yàn)室的研究生們表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質(zhì)量參數(shù)，如重復(fù)率、板內(nèi)差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是，最重要的影響因素可能是作為檢測標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾個疑惑。不同...

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在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關(guān)注哪些細(xì)節(jié)？

熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染，標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后，凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析，無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng)，背景低?？蓪λ械鞍走M(jìn)行染色，不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中，游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致，跑膠結(jié)束時移至凝膠末端，背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Westernblot的SDS-PAGE...

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