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干細胞的原代提取

胚胎干細胞免疫學法是較為常用的分離方法，它可選擇性地殺死囊胚外層的滋養(yǎng)層細胞，而僅保留ICM。它的原理是先將胚泡與抗小鼠的血清共同孵化一段時間后，然后加入補體，在補體的作用下，外層的滋養(yǎng)細胞發(fā)生溶解，而ICM則不受影響。神經(jīng)干細胞目前，神經(jīng)干細胞的分離方法主要有三種：無血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。無血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用為廣泛，也是簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在...

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胚胎干細胞培養(yǎng)標準化操作規(guī)程

一般培養(yǎng)——維持ES細胞處于未分化狀態(tài)ES細胞培養(yǎng)用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培養(yǎng)基來阻止細胞的分化。為細胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細胞的基質(zhì)。建議每2－3天從達到80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細胞一次，細胞傳代以后，在將細胞接種在0.1％明膠包被的培養(yǎng)皿之前，通過預(yù)先將細胞接種在沒有經(jīng)過包被的組織培養(yǎng)板2個小時，使分化細胞粘附，從而將分化和未分化細胞分開。將細胞全程置于37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)基ES:配制一20×不...

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大腸桿菌轉(zhuǎn)化時免熱激及孵育的方法

中山大學的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育半小時，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格，熱激后大量菌細胞死亡，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。方法改進：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育的同時，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里，當撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激，平板可以直接放回...

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蛋白質(zhì)（酶）的提取

大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。1.有機溶劑提取法一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶，不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質(zhì)結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別*，一是因為丁醇親脂性強，特別是溶解磷脂的能力強；二是...

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大鼠I型膠原（collagen I）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

檢測范圍：96T20ug/L-800ug/L使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原（collagenI）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠I型膠原（collagenI）水平。用純化的大鼠I型膠原（collagenI）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原（collagenI），再與HRP標記的I型膠原（collagenI）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP...

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大腸癌干細胞

來自香港大學醫(yī)學院等處的研究人員發(fā)現(xiàn)大腸癌CD26+癌干細胞是導(dǎo)致癌轉(zhuǎn)移的原因，可作為預(yù)測復(fù)發(fā)或腸外轉(zhuǎn)移的指標，并有助研發(fā)標靶治療藥物，提升大腸癌病人的存活率。這一研究成果公布在CellStemCell雜志上。大腸癌是香港第二號癌癥“殺手”，每年有逾4000宗新癥，約半數(shù)患者接受傳統(tǒng)切除手術(shù)后癌細胞會轉(zhuǎn)移或擴散，而一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或擴散，5年存活率只有8%。領(lǐng)導(dǎo)這一研究的是香港大學李嘉誠醫(yī)學院腸胃及肝臟科前教授王振宇，王振宇教授的團隊與解放軍第四軍醫(yī)大學合作，曾發(fā)現(xiàn)阿司匹林及抗胃...

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沙門氏菌治療腫瘤可誘發(fā)殺滅癌細胞免疫反應(yīng)

一項在小鼠中的新的研究報告說，用沙門氏菌治療腫瘤可誘發(fā)一種能夠有效殺滅癌細胞的免疫反應(yīng)。在本研究中，該團隊發(fā)現(xiàn)，來自小鼠和人的感染了沙門氏菌的黑色素瘤細胞可增加在這些細胞中的連接蛋白43的含量。其結(jié)果是新的間隙連接形成了，它使得染有黃色熒光的小分子能夠在腫瘤細胞之間通行或從腫瘤細胞進入免疫細胞。但是研究人員希望查明，這種可使腫瘤肽進入免疫細胞的間隙連接也會在活體動物中出現(xiàn)。因此，他們對患癌的小鼠進行了沙門氏菌的治療并觀察到，正如在實驗室的分離細胞中所觀察到的，這些腫瘤肽可通過...

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成功將內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)成iPS細胞

中國臺灣一家科研機構(gòu)研究團隊利用胎兒臍帶血管里的人類臍靜脈內(nèi)皮細胞，并加入2個非致癌性基因，成功將內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)變成干細胞，且免除有致癌風險基因，研究成果和干細胞研究同步。中國臺灣衛(wèi)生研究院細胞及系統(tǒng)醫(yī)學研究所副研究員顏伶汝今天表示，2006年和2007年日本和美國分別宣布發(fā)現(xiàn)將普通皮膚細胞轉(zhuǎn)化為干細胞的方法，這種干細胞功能與胚胎干細胞相差不多，因此被稱為干細胞，簡稱iPS細胞。為了避免加入致癌性基因、又可以成功發(fā)展出干細胞，顏伶汝說，“國衛(wèi)院”團隊利用胎兒臍帶血管里的人體臍靜脈...

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