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細(xì)菌的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)步驟

在基因工程實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)菌是*的實(shí)驗(yàn)材料。質(zhì)粒的保存、增殖和轉(zhuǎn)化；基因文庫(kù)的建立等都離不開(kāi)細(xì)菌。特別是常用的大腸桿菌。大腸桿菌是含有長(zhǎng)約3000kb的環(huán)狀染色體的棒狀細(xì)胞。它能在僅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基上快速生長(zhǎng)。當(dāng)大腸桿菌在培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，其開(kāi)始裂殖前，入一個(gè)滯后期。然后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以20~30min復(fù)制一代的速度增殖。后，當(dāng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和氧耗盡或當(dāng)培養(yǎng)基中廢物的含量達(dá)到抑制細(xì)菌的快速生長(zhǎng)的濃度時(shí)，菌體密度就達(dá)到一個(gè)比較恒定...

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如何讓支原體遠(yuǎn)離你的細(xì)胞

細(xì)胞來(lái)源是關(guān)鍵支原體污染的常見(jiàn)原因之一是引入的培養(yǎng)物已經(jīng)被感染。一旦進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，這些小東西會(huì)蔓延到每個(gè)角落，讓你崩潰。要避免這種情況，簡(jiǎn)單的辦法就是不從其他實(shí)驗(yàn)室要細(xì)胞，而從供應(yīng)商或菌種保藏中心（ATCC或ECACC）購(gòu)買(mǎi)，這些細(xì)胞經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè)，確保不含有支原體。如果購(gòu)買(mǎi)有難度，或基于其他原因，不得不使用其他實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞，那么也要保持警惕，在單獨(dú)的培養(yǎng)箱中隔離，同時(shí)進(jìn)行支原體的檢測(cè)。市場(chǎng)上有多家公司提供支原體檢測(cè)試劑盒，你可自行選擇。定期檢測(cè)很重要即使實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有新來(lái)的細(xì)胞，支...

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ELISA試劑盒樣本處理及要求

ELISA試劑盒產(chǎn)品的優(yōu)劣主要是從其特異性，準(zhǔn)確性，度等幾個(gè)方面進(jìn)行判斷.由于篇幅關(guān)系，現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品特異性進(jìn)行詳細(xì)講解：特異性指的是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，專(zhuān)一性地?cái)U(kuò)增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實(shí)驗(yàn)本身的靈敏度很高，且實(shí)驗(yàn)條件未充分優(yōu)化的情況，通常會(huì)在目的片段出現(xiàn)的同時(shí)伴隨有其他的雜帶，即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象。模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性。近年來(lái)的研究結(jié)果表明，緩沖液的品質(zhì)（如離子種類(lèi)與組成，反應(yīng)優(yōu)化劑等）對(duì)保證PCR的特異性擴(kuò)增起著不...

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小鼠性腺的發(fā)育

染色體基因Sry的表達(dá)決定了胚胎中早期性腺向睪丸發(fā)育，從而進(jìn)一步?jīng)Q定了個(gè)體的性別及其生殖細(xì)胞的類(lèi)型。但是對(duì)Sry基因的表達(dá)調(diào)控，我們還知之甚少。研究人員發(fā)現(xiàn)Six基因家族中的Six1和Six4在性別決定以及性腺發(fā)育中起了非常重要的作用。同時(shí)敲除Six1和Six4的XY型小鼠胚胎會(huì)從雄性向雌性轉(zhuǎn)變，并且Sry基因不能激活，在單獨(dú)敲除Six1或Six4的小鼠中則不會(huì)出現(xiàn)這種表型。而在雙突變體XY型小鼠胚胎中外源表達(dá)Sry基因則會(huì)恢復(fù)雄性性狀。并且無(wú)論是雄性還是雌性小鼠胚胎同時(shí)缺少...

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鴨子白細(xì)胞介素4酶聯(lián)試劑盒使用方法

檢測(cè)范圍：96T10pg/ml-320pg/ml使用目的：本試劑盒用于測(cè)定鴨子血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素4（IL-4）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中鴨子白細(xì)胞介素4（IL-4）水平。用純化的鴨子白細(xì)胞介素4（IL-4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素4（IL-4），再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素4（IL-4）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在...

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體內(nèi)處理精原干細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)原理轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生促使我們理解成長(zhǎng)和發(fā)展的各個(gè)方面了有了巨大的進(jìn)步。使用各種技術(shù)將一個(gè)單細(xì)胞胚胎植入到偽孕媽媽或用干細(xì)胞植入技術(shù)生成淘汰或基因敲除小鼠。這些實(shí)驗(yàn)昂貴，勞動(dòng)密集，費(fèi)時(shí)和需要好幾個(gè)女的捐助者。精原干細(xì)胞是負(fù)責(zé)生產(chǎn)精子和合適的生殖轉(zhuǎn)換對(duì)象。Nagano等將重組逆轉(zhuǎn)錄病毒體外感染精原干細(xì)胞，然后異種移植到雄性小鼠睪丸細(xì)胞后產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生。在某些情況下受體小鼠很難接受供體的精原細(xì)胞，其成功率是相當(dāng)?shù)偷?。同樣，攜帶lacZ基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒與睪丸生殖細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)...

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胚胎干細(xì)胞表觀(guān)遺傳全景圖

人類(lèi)胚胎干細(xì)胞（hESCs）分化過(guò)程是研究細(xì)胞轉(zhuǎn)換調(diào)控機(jī)制的一個(gè)*的模型，因此近年來(lái)以胚胎干細(xì)胞為模型，研究有關(guān)干細(xì)胞分化的表觀(guān)遺傳調(diào)控已成為新的研究熱點(diǎn)。研究人員利用全基因組重亞硫酸鹽測(cè)序技術(shù)，并結(jié)合染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序方法，以及RNA測(cè)序方法，揭示了與每個(gè)胚層細(xì)胞系特異性有關(guān)的中的特殊事件。在假設(shè)遠(yuǎn)端調(diào)控元件中出現(xiàn)了一些顯而易見(jiàn)的DNA甲基化和H3K4me1譜系特異性變化，而這些元件均頻繁的與未分化人類(lèi)胚胎干細(xì)胞中多能性因子結(jié)合在一起。而且研究人員也在未分化狀態(tài)的高DNA甲...

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全功能人造復(fù)眼研制成功

蒼蠅不易被打死很大程度上得益于它的復(fù)眼，因?yàn)閺?fù)眼視野廣闊，視覺(jué)敏銳，因而復(fù)眼一直是仿生學(xué)的重要研究對(duì)象之一。歐洲研究人員日前宣布，他們已成功研制出全功能微型人造復(fù)眼，實(shí)用前景廣闊。歐盟委員會(huì)8月14日發(fā)布的消息說(shuō)，來(lái)自瑞士、法國(guó)和德國(guó)的研究人員共同完成了這個(gè)項(xiàng)目，這一人造復(fù)眼模擬了果蠅的復(fù)眼，但體積更大，直徑12.8毫米，重1.75克，由630個(gè)單眼組成，每個(gè)單眼又由一個(gè)透鏡和一個(gè)電子感應(yīng)器組成，左右視野達(dá)180度，上下視野達(dá)60度。據(jù)介紹，人造復(fù)眼具廣泛用途：把人造復(fù)眼安裝...

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